二级生物安全柜（Biological safety cabinet，BSC）是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。

二级生物安全柜使用前的准备工作

1. 在实验开始前，将所有必需的物品置于BSC内，以尽可能减少双臂进出前面开口的次数，减少破坏BSC的气幕屏障的程度。

2. 开始工作前，应调整椅子的高度使操作者的脸部在BSC前门上方。手和双臂伸入BSC中等待大约1min，使BSC调整完毕，才可以开始对物品进行处理。

3. 进风格栅不得被毛巾、研究记录本、丢弃的塑料包装纸、移液管等阻挡。

4. 所有的操作应该在距离前面的格栅4英寸里面的工作面上进行。 

二级生物安全柜工作前后的净化

1. 在开始工作以前以及完成工作以后，应至少让BSC工作4min来完成“净化”的过程，应留出将污染的空气排出BSC的时间。

2. 工作台面、BSC内壁、窗口内表面应使用75%酒精、含氯消毒剂或其他适合特殊操作的消毒剂擦拭。使用含氯消毒剂后，应用无菌水擦拭第二次以除残余氯，防止其腐蚀不锈钢台面。

3. 放到安全柜的容器和材料的表面应该以75%的乙醇擦拭，以减少将环境的杂菌带到安全柜内。

二级生物安全柜内物品的摆放

1. 在安全柜的工作台面上可以放一块塑料衬底的能吸水的毛巾。

2. 所有物品应尽可能放在工作台面后部靠近工作台后缘的位置，并使其在操作中不会阻挡后部格栅。

3. 有生物危害性的废弃物袋、盛放废弃吸管的盘子以及吸滤瓶等体积较大的物品，应该放在BSC内的某一侧。

二级生物安全柜的操作

许多在BSC内完成的操作可产生泼溅或气溶胶，操作人员必须具有良好的微生物技术，降低操作者暴露于感染性物品的潜在威胁，工作流程应从清洁到污染。

减少交叉污染的措施：培养皿或组织培养板应盖上盖子以减少向下气流对其的直接冲击；瓶盖或管帽不应放在毛巾上，应尽快盖上盖子。