微生物限度检测方法验证试验报告

  一、目的：确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性；

  二、内容：细菌、霉菌及酵母菌数测定（即：对五株阳；

  三、菌种：枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501；色念珠菌【CMCC（F）98001】、黑曲霉菌

  四、方法：常规法；培养基稀释法；薄膜法

  五、方法验证：细菌、霉菌及酵母菌数测定，进行三次；

  六、实验：

  （1）菌液组测定

  微生物限度检测方法验证试验报告

  一、 目的：确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。

  二、 内容：细菌、霉菌及酵母菌数测定（即：对五株阳性对照实菌株的回收逐一进行验证）。

  三、 菌种： 枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】、金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】、大肠埃希菌【CMCC（F）44102】、白

  色念珠菌【CMCC（F）98001】、黑曲霉菌【CMCC（F）98003】。

  四、 方法： 常规法（）；培养基稀释法（）；薄膜法（）；综合法。依据《中国药典2005年版》二部微生物限度检查方法验证实验。

  五、 方法验证：细菌、霉菌及酵母菌数测定，进行三次独立实验 ，每次平行实验回收率为70%以上。

  六、 实 验：

  （1）菌 液 组 测定所加的试验菌数。

  （2）试 验 组 平皿法计数，取供试品10g（ml），加至含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g吐温80无

  菌混合物的烧杯中，用无菌玻璃棒搅拌成团后，慢慢加入45℃的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至200ml（1：10），边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为供试液。取1ml供试液、1ml试验菌液（50～100cfu/ml） 分别注入平皿中，立即倾入营养琼脂培养基，每株菌做两个平板，按平板菌落计数方法测定其菌落数。

  （3）供试品对照组 取1m供试液注入平皿中，立即倾入营养琼脂培养基，做两个平板，按平板菌落计数方法测定其菌落数。

  （4）稀释剂对照组 试验时，可用相应的稀释剂替代供试品，加入1ml试验菌（50～100cfu/ml），立即倾入营养琼脂培养基，每株菌

  做两个平板，按平板菌落计数方法测定其菌落数。

  七 、结 论： 通过方法学验证实验证明， 采用常规法（）；培养基稀释法（）；薄膜法（）；综合法（），对5株阳性代表菌株回收率均为70%以上。

该方法适用于 微生物限度检查